Из группы карбаматных соединений наиболее широкое применение в растениеводстве для борьбы с вредителями находит севин.
Известно, что он длительное время сохраняется на растениях и токсичен для пчел. Так, R. Morse (1961) наблюдал гибель пчел, продолжавшуюся в течение трех недель после обработки насаждений севином. В течение этого времени пчелы заносят севин в мед.
Для обнаружения севина в меде Л. Ф. Соловьевой (1971) был модифицирован метод тонкослойной хроматографии, предложенный М. А. Клисенко (1965) для определения этого инсектицида в биологическом материале.
Принцип метода основан на извлечении севина из исследуемой пробы органическими растворителями (бензол, хлороформ, ацетонитрил), очистке экстрактов и последующем хроматографировании в тонком слое окиси алюминия. Подвижным растворителем служит хлороформ. Пятна севина обнаруживают после опрыскивания пластинки диазотированной сульфаниловой кислотой в щелочной среде. Чувствительность метода - 0,5 мкг севина в навеске.
Реактивы: окись алюминия для хроматографии второй степени активности, крахмал растворимый, гипс, бензол чистый для анализа, ацетон химически чистый, эфир диэтиловый, хлороформ химически чистый, ацетонитрил чистый для анализа, гексан химически чистый. Проявляющий реактив - диазотированная сульфаниловая кислота по прописи, предложенной М. А. Клисенко (1965) (состав: 0,5%-ный раствор сульфаниловой кислоты (0,5 г сульфаниловой кислоты при небольшом нагревании растворяют в 90 мл дистиллированной воды и добавляют 10 мл 20%-ного раствора соляной кислоты); 0,5%-ный раствор азотистокислого натрия; 25%-ный раствор едкого натра). Все три раствора перед применением смешивают в соотношении 1:1:2. Стандартный раствор севина в диэтиловом эфире - 100 мкг в 1мл.
Приборы и посуда для обнаружения севина в меде.
Приборы и посуда. Прибор для нанесения тонкого слоя сорбента: столик из плексигласа длиной 52 см, шириной 20 см рассчитан на закрепление двух пластинок, стеклянный валик с ограничительными кольцами толщиной 0,5 мм, шуттель-аппарат, водяная баня, электрический вентилятор, стеклянные пластинки размером 13X18 см, стеклянная камера размером 20X20X25 см с плотно прилегающей крышкой, фарфоровый кювет размером 23X14X3,5 см, колбы с притертыми пробками на 150 мл, стаканы химические на 100 мл, воронки химические диаметром 10 см, цилиндры мерные на 100 мл, делительные воронки на 100 мл, пипетки емкостью 0,1 мл, конические колбы на 1000 мл, термометры на 100° и ступки фарфоровые.
Приготовление пластинок для хроматографии. 70 г окиси алюминия, 20 г гипса и 10 г крахмала помещают в колбу, в течение 15 минут тщательно перемешивают и просеивают через сито 100 меш. Подготовленный сорбент хранят в колбе с плотно закрытой пробкой. На обезжиренную поверхность стеклянной пластинки насыпают 10-15 г сорбента и стеклянным валиком с ограничительными кольцами сорбент разравнивают слоем толщиной 0,5 мм. Пластинку с нанесенным на нее слоем сорбента под углом в 35° опускают в фарфоровый кювет с дистиллированной водой на глубину не более 0,5 см. Как только вода, равномерно пропитывая слой сорбента, достигнет верхнего края пластинки, ее вынимают и высушивают при комнатной температуре в течение 12 час.
Ход определения. 10 г меда в колбе заливают 40 мл бензола, перемешивают стеклянной палочкой в течение 5 минут, экстрагируют один час на шуттель-аппарате. Отделяют бензольный экстракт от меда фильтрованием через бумажный фильтр, фильтрат собирают в химический стакан. Мед на фильтре промывают 10 мл бензола. После этого порции бензола объединяют с фильтратом. Бензол отгоняют досуха на водяной бане (55°) и струей воздуха от вентиляторов, установленных в вытяжном шкафу. Сухой остаток растворяют в 40 мл ацетона, охлаждают на льду 30 минут.
Воск и часть пигментов выпадают в осадок. Профильтрованный через бумажный фильтр ацетон при помощи потока воздуха отгоняют досуха. Сухой остаток растворяют в 0,1 мл диэтилового эфира и наносят на хроматограмму. На ту же хроматограмму наносят пятна свидетеля стандартного раствора севина в эфире от 1 до 10 мкг.
Пятна наносят в 20 мм от краев пластинки и на таком же расстоянии друг от друга. Пластинку в вертикальном положении помещают в камеру. Нижний край пластинки погружают в растворитель не более чем на 0,5-1 см. Как только растворитель поднимается на 12 см, пластинку вынимают из камеры, сушат на воздухе и опрыскивают проявляющим реактивом.
При наличии севина на белом фоне сорбента появляются пятна красного цвета, площадь которых измеряют с помощью кальки и миллиметровой бумаги. Окраска пятен в зависимости от количеств севина, нанесенных на пластинку, сохраняется до 30 дней и более. Величины Rf составляют 0,5-0,6. Чувствительность метода 0,5 мкг препарата в навеске. Мед, содержащий севин, в пищу употреблять нельзя.